人熱休克蛋白60Hsp-60ELISA試劑盒經過數年的努力已迅速成為集科研和生產為一體的專業化生物工程公司，公司將進一步加強人才經營、產品經營，不斷提升企業的核心竟爭力，實現具有高科技產業體系、知識化創業團隊的國際化的公司，服務于生命科學領域，迎接世界經濟一體化所帶來的機遇與挑戰。

ELISA試劑盒的操作詳情：

1. 使用前，將所有試劑充分混勻，不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。

2. 根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數，每個標準品和空白孔建議做復孔，每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。

3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內，立即加入50ul的生物素標記的抗體，蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。

4. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復此操作4次，如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。

6. 甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干，重復此操作4次，如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。

7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘，避免光照。

8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。

9. 在933nm波長處測定各孔的OD值。

該試劑盒組成包括：96孔酶標板、酶標二抗、四環素抗體工作液、四環素6個濃度標準品溶液，底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、濃縮復溶液、高濃度標準品溶液、蓋板膜、自封袋、說明書和質檢報告，上海晶抗生物科技有限公司歡迎新老客戶前來訂購。

人熱休克蛋白60Hsp-60ELISA試劑盒

雙抗體夾心法：

1. 包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml，在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過液，次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘，（簡稱洗滌，下同）。

2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時，然后洗滌，（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

3. 加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml，37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

6. 結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+"、“-"號表示；也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

◇ 洗滌方法：

1. 自動洗板機：每孔加入洗滌液350μl，注入與吸出間隔60秒，洗板5次。

2. 手工洗板：甩盡孔內液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內的液體，在厚的吸水紙上拍干，洗板5次。

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