全部av―极品视觉盛宴-91手机视频在线观看-老外毛片-欧洲人激情毛片无码视频-免费啪啪网址-色香影视-51国产黑色丝袜高跟鞋-色老久久-成人做爰黄-野花视频免费在线观看-宅男噜噜噜66网站高清-成人在线视频免费-国产无遮挡a片无码免费-欧美日韩在手机线旡码可下载-国产日产欧产精品精乱了派-国产精品久久自在自线不卡-免费网站成人-欧美xxxx黑人又粗又大-欧美我不卡-狠狠干in

細胞上清：需保證各組間培養細胞的數量基本一致，細胞生長狀態良好。建議采用6孔板培養細胞，并保證細胞數量達到106左右，即細胞密度達70%-80%左右，即可收集培養液，于2-8℃、1000×g離心20分鐘，除去雜質及細胞碎片，取上清檢測。

細胞裂解液：貼壁細胞用冷的PBS輕輕清洗，1000×g離心5分鐘后收集細胞；懸浮細胞可直接離心收集。收集的細胞用冷的PBS洗滌3次。每106個細胞中加入150-200μL PBS重懸（推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑；若含量很低，可減少PBS的體積），并通過反復凍融或超聲，使細胞破碎。將提取液于2-8℃、1500×g離心10分鐘，取上清檢測。

反復凍融：-80℃放置1h/液氮放置0.5h，然后置于30℃水浴鍋中，輕微振蕩，使其迅速融化，此操作反復2-3次即可。

超聲方法：用超聲波發生器，以振幅14μm超聲處理30 s，在冰水浴條件下，破碎細胞；或者使用超聲波破碎儀，200 W，2 s/次，間隙3 s，總時間5 min。

樣本中建議提前加入蛋白酶抑制劑，常規推薦PMSF：工作濃度:17~174μg/mL(0.1~1mM)。

細胞培養過程中，有許多條件需要摸索，包括細胞類型、培養基組分、細胞數量、生產狀態、干預條件和物質等。前期基礎打得牢固，對后續ELISA或其他種類實驗的開展，及結果的分析，具有更多的參考意義。