ELISA試劑盒動物種類的選擇主要根據抗原的生物學特性和所要獲得抗血清數目，如一般制備抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因動物反應良好，而且能夠提供足足數目的血清，用于免疫的動物應適齡，健壯，無感染性疾患，為雄性，此外還需十分留意動物的飼養，以消除動物的個體差異以及在免疫過程中死亡的影響。放血過程中要嚴格按無菌要求進行。在無菌前提，吸出血清，分裝（0.05～0.2ml），貯于-40℃以下冰箱，或凍干后貯存于4。取動脈或靜脈放血時，將兔放入一個特造的木匣或籠內，耳露于箱（籠）外，也可由另一人抓住兔身。為避免損失抗原，亦可用一打針器裝抗原液，另一打針器裝佐劑，二者以聚乙烯塑料管連接，然后二者往返反復抽吸，約數十分鐘后即能*乳化。交叉反應率一般是用競爭按捺曲線來判定的。若用兔，用純種新西蘭兔，一組三只，兔的體重以2～3kg為宜。
ELISA試劑盒兔是zui常用以產生抗體的動物，因此這里主要討論兔血的收集。通常，特異性是以交叉反應率來表示的。頸動脈放血時，將兔仰臥，固定于兔臺，剪去頸部的毛，切開皮膚，暴露頸動脈，插管，放血。以不同濃度的抗原和近似抗原物質分別做競爭按捺曲線，計算各自的結合率（B/T或B/B0），求出各安閑IC50時的濃度，按下列公式計算交叉反應率。二禮拜后，可在另一耳放血。此法可反復多次放血。
作免疫用的動物有哺乳類和禽類，主要為羊、馬、家兔、猴、豬、豚鼠、雞等，實驗室常用者為家兔、山羊和豚鼠等。在第2次加強免疫后2周，從耳緣靜脈取2～3ml血，制備血清，檢測抗體效價。羊等較大動物以頸靜脈、動脈取血，鼠等小動物取血可參閱有關資料。剪去耳緣的毛，用少許二甲苯涂抹耳廓，30s后，耳血管擴張、充血。用手輕拉耳尖，以單面剃須刀或尖的手術刀片，快速切開動脈或靜脈，血液即流出，每次可收集30～40ml 。免疫前取等容積*或不*佐劑與免疫原溶液混合，用振蕩器混勻成乳狀，也可以在免疫前取需要量佐劑置乳缽中研磨，平均后再邊磨邊滴加入等容積抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再繼承研磨成乳劑，滴于冰水上5～10min內*不擴散為止。交叉反應率低，表示抗血清的特異性好，反之則特異性差。
收集的血液置于室溫下1h左右，凝固后，置4℃下，過夜（切勿冰凍）析出血清，離心，4000rpm，10min。取兔血有兩種方法，一是耳緣靜脈或耳動脈放血，二是頸動脈入血，也可心臟采血。加強免疫時用不*佐劑，免疫時皮下打針百日咳疫苗0.5ml，加強免疫時不必打針百日咳疫苗。特異性好就是抗血清的識別能力強，當抗體效價達到預期水平時，即可放血制備抗血清。抗原劑量，劑量為300～500μg，加強免疫的劑量約為劑量為1/4左右。 C冰箱保留。檢查合格后即以其中一打針器作打針用。佐劑除了延長抗原在體內的存留時間，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激網狀內皮系統，使介入免疫反應的免疫活性細胞增多，促進T細胞與B細胞的相互作用，從而增強機體對抗原的細胞免疫和抗體的產生。如未達到預期效價，需再進行加強免疫，直到滿足時為止。
常用的佐劑是福氏佐劑（Freund adjuvant），其成分通常是羊毛脂1份、石臘油5份，羊毛脂與石臘油的比例，視需要可調整為1：2～9（V/V），這是不*福氏佐劑，在每毫升不*佐劑加入1～20mg卡介苗就成為*佐劑。每2～3周加強免疫一次。途徑的選擇決定于抗原的生物學特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物學活性抗原，一般不宜采用靜脈打針。因為不同個體對統一抗原的反應性不同，而且不同抗原產生免疫反應的能力也有強有弱，因此經常在打針抗原的同時，加入能增強抗ELISA試劑盒原的抗原性物質，以刺激機體產生較強的免疫反應，這種物質稱為免疫佐劑。配制方法：按比例將羊毛脂與石蠟油置容器內，用超聲波使之混勻，高壓滅菌，置4℃下保留備用。
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